一版廣受歡迎，新版維持一版內容特色。系統介紹現代分子生物學(xué)各種傳統和新型的實(shí)驗技術(shù)，新版增加了CRISPR基因編輯技術(shù)、長(cháng)鏈非編碼RNA研究實(shí)驗技術(shù)等新內容，并對非編碼RNA數據庫及在線(xiàn)工具一章進(jìn)行重寫(xiě)。實(shí)驗方案部分強調對實(shí)驗結果作具體分析，每個(gè)實(shí)驗結果都附圖（照片），圖中設陰陽(yáng)性對照，對照圖對實(shí)驗結果進(jìn)行詳細分析，使讀者對實(shí)驗結果一目了然，還指出了每個(gè)技術(shù)的難點(diǎn)和解決辦法。 分子生物學(xué)工作者案頭常備實(shí)驗手冊工具書(shū)。

分子生物學(xué)是從分子水平對生物學(xué)進(jìn)行研究的科學(xué)，現代分子生物學(xué)技術(shù)的誕生使生命科學(xué)的發(fā)展得以大力推進(jìn)，分子生物學(xué)技術(shù)在生物學(xué)、醫學(xué)、農林業(yè)、制藥學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域得到了廣泛的應用。該技術(shù)是目前從事生命科學(xué)研究的重要手段，是每個(gè)從事這個(gè)領(lǐng)域的科技工作者都必須熟練掌握的基本技術(shù)。
編寫(xiě)本書(shū)的目的在于彌補以往的書(shū)籍中對實(shí)驗結果分析的缺乏，本書(shū)強調對實(shí)驗結果作具體的分析，如需附結果的圖或照片，圖中要有陰陽(yáng)性對照等。結合照片分析研究結果，列舉實(shí)驗中經(jīng)常遇到的問(wèn)題及可能的解決方法是本書(shū)的特色。讀者閱讀后在實(shí)驗結果解讀和改進(jìn)實(shí)驗方法等方面都能豁然開(kāi)朗。此外，本書(shū)在編寫(xiě)的內容上也力求全面，第一到六章包括分子克隆所需的技術(shù)，從基因的提取、克隆到目的基因的表達；第七到十三章分別介紹了報告基因分析、差異基因表達譜分析、蛋白質(zhì)與核酸/蛋白質(zhì)的相互作用、微生物體內同源重組技術(shù)、基因編輯和轉基因動(dòng)物等技術(shù)；最后五章則對流式細胞術(shù)、干細胞的分離培養與誘導分化技術(shù)、微RNA、長(cháng)鏈非編碼RNA，以及非編碼RNA數據庫及在線(xiàn)分析工具進(jìn)行了介紹。本書(shū)適合所有從事生命科學(xué)研究的科技工作者、教師和研究生使用。
本書(shū)大多由工作在第一線(xiàn)的青年科技工作者和博士研究生撰寫(xiě)，由于時(shí)間倉促，加上編者水平有限，書(shū)中難免有疏漏和不妥之處，懇請讀者指正。

葉棋濃
軍事醫學(xué)研究院生物工程研究所
2024年4月于北京

葉棋濃，軍事科學(xué)院軍事醫學(xué)研究院某所科技委主任，研究員，博士生導師。國家杰出青年科學(xué)基金獲得者，享受?chē)鴦?wù)院政府特殊津貼。中國生物工程學(xué)會(huì )副秘書(shū)長(cháng)、中國生物工程學(xué)會(huì )醫學(xué)生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)委員會(huì )主任委員、中國分析測試協(xié)會(huì )標記免疫分析專(zhuān)業(yè)委員會(huì )副主任委員。Frontiers in Cell and Developmental Biology和Frontiers in Oncology雜志副主編，Science Bulletin雜志特邀編委。主要從事腫瘤發(fā)生、侵襲、轉移、耐藥相關(guān)基因功能及機制研究，發(fā)現了新的調控重要信號轉導通路的基因和非編碼RNA，為腫瘤的診斷和治療提供候選靶標。以通訊作者在Cancer Cell、Nature Communications、Science Advances、Journal of Clinical Investigation、Advanced Science、Science Bulletin、STTT等SCI雜志上發(fā)表文章90余篇。獲北京市科學(xué)技術(shù)一等獎1項，軍隊科技進(jìn)步二等獎1項。

本書(shū)第一版廣受讀者歡迎。新版延續第一版內容特色，系統介紹現代分子生物學(xué)各種傳統和新型的實(shí)驗技術(shù)，涵蓋核酸提取技術(shù)、目的基因的獲取及鑒定技術(shù)、載體的構建和鑒定、細菌轉化與細胞轉染技術(shù)、外源基因表達的鑒定、報告基因分析、差異基因表達譜分析、蛋白質(zhì)-核酸相互作用技術(shù)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用技術(shù)、微生物體內同源重組技術(shù)、轉基因動(dòng)物技術(shù)、基因編輯技術(shù)、流式細胞術(shù)實(shí)驗方法、干細胞的分離培養與誘導分化、微RNA的構造及實(shí)驗技術(shù)、長(cháng)鏈非編碼RNA研究實(shí)驗技術(shù)、非編碼RNA數據庫及在線(xiàn)分析工具。
新版增加了CRISPR基因編輯技術(shù)、長(cháng)鏈非編碼RNA研究實(shí)驗技術(shù)等新內容，并對非編碼RNA數據庫及在線(xiàn)分析工具一章進(jìn)行重寫(xiě)。和第一版一樣，實(shí)驗方案部分強調對實(shí)驗結果作具體分析，每個(gè)實(shí)驗結果一般附圖（照片），圖中設陰陽(yáng)性對照，對照圖對實(shí)驗結果進(jìn)行詳細分析，使讀者對實(shí)驗結果一目了然，還指出了每個(gè)技術(shù)的難點(diǎn)和解決辦法。
本書(shū)是生物、醫學(xué)領(lǐng)域相關(guān)實(shí)驗室的案頭實(shí)驗操作工具書(shū)，可供從事生命科學(xué)研究的碩士、博士等科技工作者和教學(xué)一線(xiàn)教師日常查閱參考。

第一章分子生物學(xué)技術(shù)概述1
一、引言1
二、目的基因的獲取1
三、克隆載體的選擇2
四、載體的轉化2
五、重組子的篩選3
六、基因表達4
七、生物工程技術(shù)的應用5
參考文獻6

第二章核酸提取技術(shù)7
第一節質(zhì)粒DNA的提取7
一、引言7
二、堿裂解法小量質(zhì)粒提取所需的儀器、材料及基本步驟8
三、Promega質(zhì)粒DNA小量提取試劑盒操作程序9
四、注意事項9
五、實(shí)驗結果說(shuō)明10
六、疑難解析10
第二節基因組DNA的提取12
一、引言12
二、從植物組織提取基因組DNA13
三、從動(dòng)物組織提取基因組DNA14
四、細菌基因組DNA的制備14
五、用DNA提取試劑盒從全血和組織中提取基因組DNA15
六、注意事項17
七、實(shí)驗結果說(shuō)明17
八、疑難解析18
第三節RNA的提取19
一、引言19
二、實(shí)驗設計思路和基本步驟20
三、實(shí)驗結果說(shuō)明24
四、疑難解析24
參考文獻25

第三章目的基因的獲取及鑒定技術(shù)26
第一節普通PCR26
一、普通PCR的基本概念和原理26
二、普通PCR技術(shù)的實(shí)驗方法27
三、疑難解析32
第二節實(shí)時(shí)熒光定量PCR33
一、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的基本概念和原理33
二、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的定量方法36
三、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的實(shí)驗方法42
四、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的應用47
五、疑難解析53
第三節環(huán)介導等溫擴增法快速檢測病原菌55
一、引言55
二、環(huán)介導等溫核酸擴增的原理57
三、實(shí)驗設計思路和基本步驟59
四、實(shí)驗結果66
五、疑難解析69
六、小結70
參考文獻72

第四章載體的構建和鑒定76
第一節克隆載體76
一、pBR322載體76
二、pUC8——一種Lac選擇型質(zhì)粒78
三、pGEM3Z——克隆DNA的體外轉錄78
四、柯斯質(zhì)粒載體78
第二節表達載體79
一、原核表達載體80
二、真核表達載體82
第三節載體構建中的關(guān)鍵工具和步驟87
一、關(guān)鍵工具87
二、常規克隆關(guān)鍵步驟89
三、同源重組克隆關(guān)鍵步驟91
第四節載體構建的應用舉例92
一、常規克隆實(shí)驗材料92
二、常規克隆實(shí)驗方法93
三、同源重組克隆實(shí)驗材料97
四、同源重組克隆實(shí)驗方法98
五、疑難問(wèn)題解析100
參考文獻100

第五章細菌轉化與細胞轉染技術(shù)102
第一節細菌轉化102
一、基本原理102
二、實(shí)驗設計思路和基本步驟103
三、實(shí)驗結果及分析104
四、疑難解析104
第二節細胞轉染105
一、基本原理106
二、實(shí)驗設計和基本步驟108
三、實(shí)驗結果及分析110
四、疑難解析111
參考文獻112

第六章外源基因表達的鑒定113
第一節Northern Blot113
一、引言113
二、實(shí)驗設計思路和基本步驟113
三、實(shí)驗結果說(shuō)明116
四、疑難解析117
第二節RT-PCR117
一、引言117
二、實(shí)驗設計思路和基本步驟117
三、實(shí)驗結果說(shuō)明120
四、疑難解析120
第三節Western Blot121
一、引言121
二、實(shí)驗設計思路和基本步驟121
三、實(shí)驗結果說(shuō)明126
四、疑難解析126
第四節ELISA127
一、引言127
二、實(shí)驗設計思路和基本步驟129
三、實(shí)驗結果說(shuō)明131
四、疑難解析131
參考文獻132

第七章報告基因分析134
第一節報告基因的定義和種類(lèi)134
一、報告基因的定義134
二、常用的報告基因134
第二節應用報告基因分析基因的轉錄活性135
一、實(shí)驗原理135
二、實(shí)驗設計和基本步驟136
三、實(shí)驗結果分析137
四、疑難解析140
第三節報告基因在動(dòng)物活體成像中的應用140
一、實(shí)驗原理140
二、實(shí)驗設計和基本步驟142
三、實(shí)驗結果分析143
四、疑難解析143
參考文獻145

第八章差異基因表達譜分析147
第一節基于雙向電泳技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)分析147
一、引言147
二、實(shí)驗基本步驟和注意事項147
三、雙向電泳實(shí)驗結果說(shuō)明及疑難解析154
四、質(zhì)譜數據分析說(shuō)明及疑難解析154
五、結語(yǔ)159
第二節基因芯片160
一、引言160
二、工作原理161
第三節基因芯片的制備163
一、概述163
二、探針的選擇和制備163
三、基因芯片基片的選擇和準備165
四、基因芯片的制作166
第四節基因芯片的檢測168
一、基因芯片的雜交和數據獲取168
二、基因芯片分析常用的軟件和數據庫169
第五節基因芯片的應用170
一、基因芯片與病原微生物檢測170
二、基因芯片與腫瘤172
三、基因芯片與藥物研發(fā)174
四、結語(yǔ)176
參考文獻176

第九章蛋白質(zhì)-核酸相互作用技術(shù)178
第一節凝膠遷移實(shí)驗178
一、引言178
二、實(shí)驗設計與基本步驟179
三、實(shí)驗舉例與結果說(shuō)明184
四、需要注意的問(wèn)題186
第二節染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)187
一、引言187
二、實(shí)驗基本步驟188
三、實(shí)驗舉例189
四、實(shí)驗注意事項192
第三節RNA沉降192
一、實(shí)驗基本原理192
二、實(shí)驗基本思路192
三、實(shí)驗舉例說(shuō)明197
第四節RIP實(shí)驗198
一、實(shí)驗基本原理198
二、實(shí)驗思路199
三、注意事項200
四、實(shí)驗舉例說(shuō)明201
參考文獻201

第十章蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用技術(shù)202
第一節運用酵母雙雜交技術(shù)篩選與靶蛋白相互作用的蛋白質(zhì)202
一、引言202
二、實(shí)驗儀器及材料203
三、實(shí)驗設計流程204
四、實(shí)驗方法204
五、實(shí)驗結果說(shuō)明210
六、疑難解析214
第二節GST沉降214
一、實(shí)驗基本原理214
二、實(shí)驗基本步驟215
三、實(shí)驗舉例217
四、實(shí)驗注意事項221
第三節免疫共沉淀222
一、引言222
二、實(shí)驗設計和基本步驟223
三、實(shí)驗結果舉例225
四、需要注意的問(wèn)題227
第四節細胞共定位228
一、引言228
二、實(shí)驗設計和基本步驟228
三、實(shí)驗結果舉例說(shuō)明229
四、實(shí)驗注意事項230
參考文獻231

第十一章微生物體內同源重組技術(shù)232
第一節傳統的大腸桿菌體內同源重組方法（RecA重組系統）232
一、引言232
二、利用RecA重組系統構建痢疾桿菌hns基因插入突變體232
三、RecA重組系統構建突變體的其他方法235
四、存在的問(wèn)題和解決方法236
五、小結236
第二節Red/ET重組系統237
一、引言237
二、痢疾桿菌hns基因缺失突變體的構建238
三、Red同源重組技術(shù)應用策略241
四、應用Gap-Repair克隆技術(shù)構建pBR322-Red載體242
五、Red/ET重組系統的其他應用244
六、小結245
參考文獻245

第十二章轉基因動(dòng)物技術(shù)247
第一節轉基因動(dòng)物概述247
一、轉基因動(dòng)物的概念247
二、轉基因動(dòng)物的分類(lèi)247
三、轉基因動(dòng)物的命名248
四、轉基因動(dòng)物技術(shù)的基本原理249
五、轉基因動(dòng)物的安全性和倫理學(xué)問(wèn)題250
六、轉基因動(dòng)物技術(shù)的發(fā)展概況251
第二節顯微注射法制備轉基因動(dòng)物252
一、儀器設備及材料和試劑252
二、實(shí)驗動(dòng)物準備253
三、轉基因動(dòng)物制備方法254
四、影響轉基因動(dòng)物產(chǎn)生效率的因素257
第三節利用ES細胞制備轉基因動(dòng)物258
一、ES細胞的研究歷史258
二、ES細胞的生物學(xué)特性258
三、ES細胞分離培養的基本方法259
四、ES細胞的遺傳修飾263
五、轉基因動(dòng)物制備270
參考文獻271

第十三章基因編輯技術(shù)272
第一節基因打靶技術(shù)273
一、基因打靶技術(shù)的原理273
二、利用同源重組構建基因打靶動(dòng)物模型的基本步驟273
三、基因打靶的策略276
四、基因打靶的生物學(xué)意義和應用前景287
第二節CRISPR/Cas9系統288
一、CRISPR/Cas系統的簡(jiǎn)介及其作用原理288
二、TypeⅡ CRISPR/Cas9系統289
三、CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的應用舉例291
四、CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的應用前景295
第三節CRISPR/Cas13系統296
一、CRISPR/Cas13系統的介紹296
二、實(shí)驗基本步驟296
三、注意事項298
四、實(shí)驗結果說(shuō)明298
五、疑難解析300
參考文獻300

第十四章流式細胞術(shù)實(shí)驗方法305
一、引言305
二、實(shí)驗方法308
三、實(shí)驗結果分析313
四、流式細胞分析的質(zhì)量控制323
參考文獻325

第十五章干細胞的分離培養與誘導分化327
第一節人胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細胞的分離培養與純化327
一、引言327
二、材料、試劑與主要儀器設備328
三、實(shí)驗方法329
四、實(shí)驗結果332
五、注意事項337
第二節小鼠間充質(zhì)干細胞的分離培養與純化338
一、引言338
二、骨髓法339
三、密質(zhì)骨法339
第三節人胚胎干細胞的培養348
一、引言348
二、實(shí)驗材料348
三、實(shí)驗方法348
四、注意事項352
第四節CD34+造血干細胞與CD14+單核細胞向樹(shù)突狀細胞的誘導分化353
一、引言353
二、實(shí)驗材料與方法354
三、實(shí)驗結果357
四、注意事項359
參考文獻359

第十六章微RNA的構造及實(shí)驗技術(shù)364
第一節miRNA克隆364
一、材料與設備365
二、實(shí)驗方法365
三、疑難解析368
第二節miRNA Northern Blot368
一、材料與設備368
二、實(shí)驗方法369
三、疑難解析369
第三節miRNA原位雜交370
一、材料與設備370
二、實(shí)驗方法371
三、疑難解析371
第四節基于poly（A）加尾的miRNA RT-PCR372
一、材料與設備372
二、實(shí)驗方法373
三、疑難解析374
第五節miRNA功能研究375
一、miRNA表達檢測375
二、miRNA功能篩選鑒定376
三、miRNA靶基因鑒定377
四、miRNA非經(jīng)典功能378
第六節siRNA的構造及實(shí)驗研究379
一、引言379
二、如何進(jìn)行RNAi實(shí)驗381
三、常用RNAi實(shí)驗的基本步驟384
四、實(shí)驗結果說(shuō)明388
五、疑難解析389
參考文獻390

第十七章長(cháng)鏈非編碼RNA研究實(shí)驗技術(shù)392
第一節lncRNA克隆392
一、材料與設備393
二、實(shí)驗方法393
三、實(shí)驗注意事項396
第二節lncRNA Northern Blot396
一、材料與設備396
二、實(shí)驗方法396
三、實(shí)驗注意事項397
第三節lncRNA原位雜交398
一、材料與設備398
二、實(shí)驗方法398
三、實(shí)驗注意事項399
第四節lncRNA定量檢測400
一、材料與設備400
二、實(shí)驗方法400
三、實(shí)驗注意事項400
第五節lncRNA-蛋白質(zhì)互作研究技術(shù)401
一、RNA pull-down鑒定特定lncRNA結合的蛋白質(zhì)401
二、RIP鑒定特定蛋白質(zhì)結合的lncRNA免疫沉淀技術(shù)404
三、CLIP鑒定蛋白質(zhì)與lncRNA的結合位點(diǎn)405
四、ChIRP鑒定與lncRNA結合的蛋白質(zhì)/DNA408
參考文獻412

第十八章非編碼RNA數據庫及在線(xiàn)分析工具介紹414
第一節綜合性非編碼RNA數據庫414
一、概論414
二、非編碼RNA相關(guān)數據庫415
三、小結425
第二節miRNA相關(guān)數據庫及預測工具425
一、概論425
二、miRNA相關(guān)數據庫425
三、miRNA相關(guān)預測工具434
四、小結442
第三節rRNA相關(guān)數據庫及預測工具442
一、概述442
二、rRNA相關(guān)數據庫442
三、rRNA相關(guān)預測工具448
四、小結449
第四節sRNA相關(guān)數據庫及預測工具450
一、概述450
二、sRNA相關(guān)數據庫450
三、sRNA靶標相關(guān)預測工具452
四、小結454
第五節siRNA相關(guān)數據庫454
一、概述454
二、siRNA相關(guān)數據庫454
第六節tRNA相關(guān)數據庫及預測工具460
一、概述460
二、tRNA相關(guān)數據庫460
三、tRNA相關(guān)預測工具470
四、小結472
第七節snoRNA相關(guān)數據庫及預測工具472
一、概述472
二、snoRNA相關(guān)數據庫472
三、snoRNA相關(guān)預測工具473
四、小結476
第八節lncRNA及circRNA相關(guān)數據庫477
一、概論477
二、lncRNA及circRNA相關(guān)數據庫477
三、小結497
參考文獻498